Публикации автора

ВВЕДЕНИЕ. Несмотря на широкое использование в генотерапевтических препаратах на основе рекомбинантных аденоассоциированных вирусов (rAAV) искусственных промоторов, основанных на промоторе β-актина курицы (обозначаемых как CAG, CBA или CB), данные об активности таких промоторов в разных тканях и возрастной динамике остаются ограниченными. В настоящей работе проведена количественная оценка активности CAG-промотора в различных органах мышей в постнатальном периоде для определения его применимости при разработке rAAV-опосредованной терапии.

ЦЕЛЬ. Оценка относительной активности CAG-промотора и ее динамики в органах мышей в возрасте 3–12 недель.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. 2-дневным мышам линии ICR (CD-1) однократно вводили rAAV9 с кассетой для экспрессии SMN под контролем CAG-промотора. На 3, 6 и 12-й нед. после инъекции из образцов органов (головной мозг, спинной мозг, печень, легкие, сердце, четырехглавая мышца бедра) выделяли тотальную ДНК и РНК. Содержание вирусных геномов rAAV и мРНК SMN в препаратах нуклеиновых кислот определяли методом количественной ПЦР. Относительную активность промотора рассчитывали как отношение концентрации мРНК SMN к концентрации вирусных геномов (rAAV), нормализованное на соотношение РНК: ДНК в органе. Для анализа данных вычисляли среднее геометрическое и использовали регрессионный анализ.

РЕЗУЛЬТАТЫ. Активность CAG-промотора значительно варьировала в разных органах. На 3 нед. после инъекции наибольшие значения активности отмечены в четырехглавой мышце бедра, в 4,7–9,7 раза превышающие таковые в других органах. Также обнаружено, что в головном мозге и легких с 3 по 12 нед. после инъекции активность промотора снижалась в 4,7 раза (p=0,0094) и в 5,2 раза (p=0,0039) соответственно, в то время как в других тканях существенных изменений активности не наблюдалось.

ВЫВОДЫ. C AG-промотор малопригоден д ля экспрессии т рансгена в к летках легких и головного мозга вследствие транскрипционного сайленсинга, а также не является оптимальным для экспрессии в клетках печени из-за относительно низкой активности. Эти данные следует учитывать при разработке генотерапевтических препаратов.

Введение. Артериальное давление (АД) — важный гемодинамический показатель, характеризующий состояние сердечно-сосудистой системы, выполняющий важную роль при экспериментальном моделировании патологических состояний, связанных с нарушением гемодинамики (например, кровопотери или геморрагического шока) в биологических тест-системах. В современной практике при проведении исследований применяются инвазивные и неинвазивные методы измерения АД. Однако если в задачи исследования входит регистрация АД при моделировании патологических состояний, связанных с нарушением процессов гемодинамики, таких как геморрагический шок, то с существующими методами измерения АД получение точных, достоверных данных зачастую бывает затруднительно. Цель исследования — разработка малоинвазивного, непрерывного метода регистрации АД в хвостовой артерии у крыс, как под анестезией, так и без нее, в том числе без использования антикоагулянтов; сравнительный анализ различных методик измерения АД у интактных животных, при экспериментальном моделировании геморрагического шока. Материалы и методы. К работе привлечено 110 самцов крыс, Sprague Dawley, весом 360±20 г. В процессе эксперимента разработан малоинвазивный метод регистрации АД, выполнено хирургическое моделирование геморрагического шока, проведен сравнительный анализ различных методик измерения АД. Результаты исследования. Установлено, что разработанный метод можно считать точным и малотравматичным, позволяющим выполнять быстрые, непрерывные измерения АД в режиме реального времени, как под общей анестезией, так и без нее, без использования антикоагулянтов. Точность измерений не зависит от характера, сложности экспериментального исследования и общей гемодинамической картины животного.