Научный архив: статьи

В рамках разработки отечественной диагностической тест-системы с использованием технологии xMAP-ASPE-xTAG с целью ранней диагностики и выявления предрасположенности к развитию меланомы по разработанному авторами протоколу детекции мутаций анализируемых генов в образцах узловой меланомы (NM) и диспластического невуса с пигментным компонентом (DMN) отработаны этапы определения в одном аналите нескольких мутаций, сопряженных с онкогенезом меланомы – BRAF (rs113488022; p. V600E; c.1799T>A), MITF-М (rs149617956; p. E318K; c.952G>A), CDKN2А (rs121913386, p. P114L, c.341C>T; rs121913387, p. R58*, c.172C>T; rs121913388, p. R80*, c.238C>T; rs121913389, p. W110*, c.330G>A; rs1057519852, p. W110*, c.329G>A). У трех пациентов из четырех с локализацией DMN в области тела non-CSD выявлено наличие мутантного варианта гена BRAF. У одного пациента из этой группы определены мутации в трех генах – BRAF, MITF-М, CDKN2А. У одной пациентки не выявлено наличия мутантных вариантов анализируемых генов, в сочетании с гистологическими характеристиками данное образование можно отнести к банальному меланоморфному невусу (доброкачественная меланоцитома). По результатам генетического скрининга выявлены два вида меланом относительно драйверной мутации гена BRAF: 1-я группа – меланомы BRAF-негативные (wtBRAF); 2-я группа – меланомы BRAF-позитивные (mtBRAF). У всех трех пациентов с узловой меланомой с пигментным компонентом (NM) wtBRAF образования локализованы в соответствии с кумулятивным солнечным повреждением lowCSD, выявлена мутация гена CDKN2A и дополнительно у двух пациентов – мутация гена MITF-М. В группе mtBRAF меланом (пять пациентов) выявлены меланомы как mtBRAF NM с пигментным компонентом, так и mtBRAF амеланотического варианта NM (ANМ). В частности, mtBRAF NM обнаружена у трех пациентов, и у одного из этой группы дополнительно выявлена мутация MITF-М. Также к данной группе отнесли двух пациентов mtBRAF ANM, при этом у пациента женского пола дополнительно выявлена мутация CDKN2A. Все образования данной группы с локализацией в соответствии с кумулятивным солнечным повреждением как lowCSD, так и highCSD. Оптимизация условий проведения исследований позволила достичь приемлемой чувствительности и надежной производительности детекции анализируемых мутаций генов.

В пилотном исследовании в моноплексном режиме отработан протокол детекции мутантной ДНК в образцах диспластического невуса кожи с разной концентрацией, используя технологию xMAPASPE с определением предела специфичности, оптимальной концентрации реагентов и условий для детекции мутаций генов BRAF в 15 экзоне (p. V600E, c.1799T > A) и MITF в 9 экзоне (p. E318K, c.952G > A). Выявлена зависимость показателя индекса чистой медианной флуоресценции (Net MFI) и концентрации мутантной ДНК с полом. Работа проводится в рамках разработки отечественной диагностической тест-системы с использованием технологии xMAP-ASPE с целью ранней диагностики и выявления предрасположенности к развитию меланомы.